贵州医科大学学报

底物浓度选择在酶Km值测定中的重要性

以胰蛋白酶对酪蛋白的Ｋｍ值测定为例，讨论了底物浓度选择在酶Ｋｍ值测定中的重要性。底物酪蛋白的浓度分为三组：高浓度（１～５ｍｇ／ｍｌ），低浓度（０．１～１ｍｇ／ｍｌ）和极低浓度（０．０２～０．０８ｍｇ／ｍｌ），高底物浓度（＞８Ｋｍ）的测定结果不能有效地区分多酶（作用于同一底物的多种酶）的存在，也不符合作图法要求的准确度，所得到的Ｋｍ值可能是不准确的或错误的。因此，测定Ｋｍ值时所用的底物浓度必须在０．２～５Ｋｍ范围内，必要时应包括更广泛的浓度范围（包括高底物浓度）。

维生素C注射液处方和生产工艺的改进

维生素Ｃ注射液处方和生产工艺的改进赵松华，吕军（贵州省卫生防疫站贵阳５５０００１贵阳生物化学制药厂）长期以来，维生素Ｃ注射液一直是用Ｎａ２Ｓ２Ｏ５作稳定剂，用ＮａＨＣＯ３调ｐＨ［１］。由于处方和生产工艺条件方面的原因，该剂极易氧化，使颜色变黄，为提高...

贵州燃煤污染型地方性砷中毒研究进展与展望

<正>砷暴露是一个全球性公共卫生问题,目前全世界有超过2亿人口的饮用水砷含量超标,主要分布于印度、孟加拉国、美国、智利、中国及加纳等地;而生活在特定地区的居民因长期使用无排烟设施的炉灶燃用高砷煤后造成室内空气和食物污染所致的燃煤污染型地方性砷中毒(以下简称燃煤型砷

透射电镜超薄切片法与负染法探讨

透射电镜生物样品超薄切片技术是医学生物学研究中常用的方法。其它一些制备技术如免疫电镜、电镜细胞化学、放射自显影等，都必须进行超薄切片；而超薄切片所显示的生物样品的微细结构，也是识别扫描电镜图像、冷冻蚀刻复型及其他电镜图像的基础。负染色是相对正染色而言...

海马神经元原代细胞培养方法的改良

目的:旨在建立一种简单、稳定的SD乳鼠海马神经元的分离及原代培养方法。方法:选用出生24 h内的SD乳鼠,在数码显微镜下分离双侧海马体,剥离去除海马体上的包膜血管,剪碎吹打海马组织、胰酶消化后,获得细胞悬液,用含胎牛血清的DMEM高糖型种植培养基培养8 h后,再用添加B27的Neuralbasal维持型培养基行原代培养,第7天采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色鉴定神经元纯度,CCK-8法检测海马神经元细胞活力。结果:提取的海马神经元细胞形态完整,胶质细胞少,基本无杂质,生长状态良好,胞体丰满,培养的海马神经元之间能形成密集的网络结构; NSE免疫组化鉴定培养的海马神经元纯度达90%,CCK8显示培养第1～6天培养的海马神经元活性逐渐增强,第7天达峰值。结论:本方法能够提高海马神经元细胞纯度以及细胞活性,是一种稳定高效的海马神经元原代培养方法。

软膏剂体外释药研究

软膏剂体外释药研究孙容波（贵阳医学院药剂学教研室）软膏剂是将药物加入适宜基质中制成的外用制剂。基质是软膏剂的赋形剂和药物的载体。软膏剂发挥疗效的首要前提是混合在基质中的药物须以适当的速度和足够的量释放到皮肤表面，可以通过研究药物从基质中的释放来评价软...

29种中药提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌活性

目的:评估29种中药水提物和醇提物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外抑菌活性,筛选抑菌活性最高的中药做进一步研究。方法:用K-B纸片法筛选出有抑菌活性的中药;用微量稀释法测定中药的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);并用微量棋盘稀释法测定联合用药对MRSA的抑制作用。结果:K-B纸片法筛选结果显示,29种中药水提物仅黄柏有较小的抑菌圈,7种中药的醇提物有抑菌圈,其中黄柏的抑菌圈直径最大,均值为18.1 mm;金银花和紫花地丁抑菌圈不透明; 29种中药醇提物黄柏对MRSA的抑菌活性最强,其MIC的生药浓度为125 g/L,MBC的生药浓度为250 g/L;甘草与黄苓联合应用时,抗菌指数FIC <0.5。结论:所选中药醇提物对MRSA的抑菌活性强于水提物,黄柏醇提物最能有效抑制MRSA的生长;甘草与黄苓联合应用具有协同作用,对MRSA的抑菌活性最高。

白芨多糖对大鼠血小板聚集、凝血功能及TXB₂、6-keto-PGF_1α表达的影响

目的:观察白芨多糖对大鼠血小板聚集、凝血功能及血浆血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)水平的影响,探讨白芨多糖的止血机制。方法:健康SD大鼠60只,随机分为正常对照组(生理盐水)、白芨多糖高剂量组(12 g/kg)、白芨多糖中剂量组(6 g/kg)、白芨多糖低剂量组(3 g/kg)、云南白药组(0.4g/kg),连续给药14 d;股动脉采血,测定各组大鼠血小板聚集率、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、TXB2和6-keto-PGF1α水平。结果:与空白对照组比较,白芨多糖中、高剂量能增加大鼠血小板聚集率,缩短PT、APTT和TT,显著增加FIB、TXB2含量和降低6-keto-PGF1α含量(P<0.05或P<0.01)。结论:白芨多糖可能通过激活内源性,外源性凝血系统,促进血小板聚集和调节TXB2、6-keto-PGF1α的水平,发挥止血功能。

Cas9蛋白的克隆表达、分离纯化及多克隆抗体制备

目的:获得高纯度Cas9蛋白,制备Cas9蛋白特异性抗体。方法:以Cas9基因序列为模板,设计特异性引物,PCR扩增获得Cas9基因全长序列,利用无缝拼接技术构建pET28a-Cas9重组表达载体;转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达Cas9蛋白,并利用His-Tag技术分离纯化Cas9蛋白;将纯化获得的Cas9蛋白免疫新西兰大白兔,制备Cas9蛋白多克隆抗体。结果:pET28a-Cas9重组表达载体转化的E.coli BL21(DE3)可表达Cas9蛋白,纯化的Cas9蛋白免疫家兔得到的多克隆抗体效价>1∶256 K。结论:本研究获得了高质量Cas9蛋白及多克隆抗体,为后续CRISPR-Cas9基因编辑的应用奠定了良好的基础。

细胞壁染色法的改良及真菌细胞壁染色观察