HSV-TK红色荧光蛋白融合载体在HepG2细胞中的表达

目的:建立红色荧光蛋白(red fluorescent prote in,RFP)标记的单纯疱疹病毒1型TK基因(Herpessimp lex virus thym id ine k inase,HSV-TK)的基因转移系统,并验证其有效性。方法:以pBLuescript-TK为模板,设计引物,将聚合酶链反应(PCR)扩增到的TK基因克隆到真核表达载体pD sRed2-N1中,获得以红色荧光蛋白为报告基因的重组质粒pD sRed2-N1-TK,利用脂质体转染体外培养的HepG2细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察pD sRed2-N1-TK在细胞中的分布和定位,用RT-PCR方法验证其mRNA和蛋白质的表达。结果:空载体pD sRed2-N1转染组中,HepG2细胞内红色荧光呈弥散分布;重组质粒pD sRed2-N1-TK转染组中,红色荧光集中在细胞核中,随着表达量的增加,红色荧光在细胞核中聚集成团块状,2周后稳定表达于细胞浆中;RT-PCR的结果表明,HSV-TK基因在重组质粒转染组中有表达;丙氧鸟苷(GCV)杀伤效应确证了TK基因表达产物胸苷激酶的活性。结论:pD sRed2-N1-TK融合基因真核表达载体在真核细胞HepG2中获得了表达,细胞所表达的融合蛋白具有TK和RFP的双重活性,可用荧光显微镜直接观察其表达情况及亚细胞定位,为HSV-TK/GCV治疗肿瘤研究提供了实用而又方便的工具。

整合素β1、基质金属蛋白酶9及血管内皮生长因子在前列腺癌中的表达

目的:研究整合素β1(integrinβ1)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、血管内皮生长因子(VEGF)在前列腺癌组织中的表达,探讨其与肿瘤侵袭转移的关系及相关性。方法:采用免疫组织化学染色(SP法)分别检测integrinβ1,MMP9,VEGF在15例良性前列腺增生及39例前列腺癌组织中的表达。结果:在良性前列腺增生和前列腺癌组织中integrinβ1蛋白的阳性表达率分别为80.00%和46.15%;MMP9蛋白的阳性表达率分别为33.33%和82.05%;VEGF蛋白的阳性表达率分别为46.67%和82.05%。3种蛋白在良性前列腺增生和前列腺癌组织中的阳性表达差异均有显著性(P<0.05,P<0.01)。3种蛋白的阳性表达均与肿瘤的临床分期有关(P<0.05,P<0.01),但都与前列腺癌的组织学分级无关(P>0.05)。in-tegrinβ1与VEGF之间的阳性表达呈负相关,MMP9与VEGF之间的阳性表达呈正相关。结论:本研究显示:integrinβ1,MMP9,VEGF可能共同参与了前列腺癌的浸润转移过程,联合检测integrinβ1,MMP9,VEGF的表达有利于更好的评估前列腺癌的生物学行为,可作为前列腺癌预后判断的有用指标。

天麻总DNA提取及聚合酶链反应扩增鉴定

目的:改良常用的植物DNA提取的CTAB,SDS法,以有效去除天麻多糖类杂质。方法:用CTAB法提取天麻鲜品不同部位(块茎、花序轴和胚芽)DNA;用生理盐水浸泡天麻干品之后,在应用CTAB,SDS法提取天麻干品的DNA;通过已知序列的天麻抗真菌蛋白基因片段的聚合酶链反应(PCR)扩增和PCR产物测序鉴定天麻DNA及其质量。结果:提取了44份天麻样本DNA,用CTAB法提取天麻鲜品不同部位的DNA,成功地用于PCR扩增,并通过DNA测序进一步鉴定;应用改良的CTAB,SDS法提取天麻干品DNA可用于PCR扩增,但DNA测序未成功。结论:用CTAB法提取的天麻鲜品各个部位DNA均可用于基因分析,而用天麻胚芽提取DNA的效果最理想;改良CTAB法能有效提取天麻干品DNA,提取的DNA可用于基因扩增。

用高效液相色谱法测定氨咖黄敏胶囊三组分的含量

目的:采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定氨咖黄敏胶囊中对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏的含量。方法:采用W aters Nova-pak C18(150 mm×3.9 mm,4μm)色谱柱,乙腈-0.03 mol/L磷酸氢二铵溶液为流动相,流速为1.0 m l/m in,检测波长214 nm,柱温30℃。结果:采用HPLC测定对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏的含量,线性范围分别为205.6~1 233.8μg,12.16~72.96μg,1.03~6.18μg,r=0.999 7,0.999 9,0.999 9;平均回收率分别为99.5%(RSD=0.3%),99.5%(RSD=0.5%),99.8%(RSD=0.8%)。结论:HPLC法简便、快速、准确,用此法同时测定氨咖黄敏胶囊中3个组成成分的含量,能更好地控制产品质量。

生前硅藻空气源性吸入肺最大值在溺死鉴定中的应用

目的:测定人体生前硅藻空气源性吸入肺脏之最大值,并探讨其在溺死鉴定中的应用。方法:收集100例非水中尸体案例,分别在尸检时,取肺脏边缘组织测定硅藻含量,在排出检验过程污染的条件下,其最大值即为人体生前硅藻空气源性吸入肺脏之最大值。借助8例鉴定结论为溺死之案例,以检验上述最大值在溺死鉴定中的应用价值。结果:测得空气源性吸入肺脏之最大值为2个/5 g,仅就硅藻检验而言,该值可作为溺死鉴定的界定参考值,即:(1)如水中尸体肺脏硅藻检验结果明显大于2个/5 g(本文溺死组7例9~311个/5 g),可鉴定为溺死;若稍大于2个/5 g,尚需考虑抛尸入水或干性溺死;(2)如2个/5 g,提示溺液中无硅藻或干性溺死或抛尸入水,需结合尸检发现及案情鉴别,作出最终鉴定。结论:人体生前硅藻空气源性吸入肺脏之最大值在溺死鉴定中有一定应用价值。

3265名大学生结核感染状况调查与相关因素分析

目的:了解大学生结核感染的状况。方法:采用结核菌素皮肤接种试验和问卷调查的方法,调查3 265名大学生结核感染情况。结果:总阳性率16.05%,5 mm,10 mm,15 mm,20 mm 4个标准的阳性率分别为7.17%,4.76%,3.58%,0.58%。源于城市的学生对结核菌素的反应性高于来自农村的学生。结论:由于年龄、生理、环境等原因,大学生是结核病的易感人群,应该采取有力的相应预防措施。

5334例受血者输血前血液传染性疾病检测的意义

目的:探讨受血者输血前经血液传播性疾病感染检测的意义。方法:对5 334例受血者输血前用微粒酶免疫法检测抗HIV和抗HCV,采用双夹心抗体酶联免疫吸附法检测梅毒抗体。结果:输血前受血者抗HIV阳性率0.26%,抗HCV阳性率1.18%,梅毒抗体阳性率0.41%。结论:受血者输血前作血液传染性疾病检测,能对受血者的健康状况作出判断,减少和杜绝医原性感染,防止医患纠纷,是一项对医患双方有自身保护作用的措施。

用甲基蓝分光光度法测定亚硝酸根

目的:研究亚硝酸根与甲基蓝的褪色反应,建立一个简单、灵敏、选择性高的亚硝酸根的测定方法。方法:采用紫外分光光度法测定不同条件下的吸光度。结果:实验表明,当甲基蓝与NO2-反应后发生颜色变化,在590 nm波长处发生褪色反应,此长波处,吸光度的变化与溶液中NO2-的浓度成正比,其线性范围在0~5 m g/L,摩尔吸光系数为ε=1.4×104L.m ol-1.cm-1,相关系数为0.995 5。结论:甲基蓝分光光度法具有良好的稳定性和选择性,用于环境水样中微量NO2-的测定,结果满意;建立了测定亚硝酸根的新方法。

母乳喂养调查及相关影响因素分析

数字钼靶摄影在男性乳腺疾病诊断中的应用

88例腹部外伤的诊治体会

尼卡地平用于气管拔管期预防血压升高的观察

幽门螺杆菌感染与特发性血小板减少性紫癜

中成药六神丸在牙髓失活治疗中的应用

40例自发性脑干出血的临床及预后分析

严格剖宫产医学指征与降低剖宫产率

以草酸铂为主联合化疗方案治疗晚期胃癌

医学影像诊断学教学方法的改革

脑血管病后抑郁症患者的护理

对听觉丧失者在X线摄影中呼令方法的改进

着色性干皮病伴基底细胞癌和鳞状细胞癌1例

4例胃肠道间质瘤的临床诊治