CRISPR/Cas9敲除HBV pre S1段对肝癌细胞中HBV病毒复制的影响
龙黎,罗新华,张茜
摘要(Abstract)：
目的 探讨CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除HBV pre S1段对肝癌细胞中HBV病毒复制的影响,分析基因编辑联合传统抗病毒药物或免疫调节剂的抗病毒疗效。方法 根据HBV pre S1段设计特异性干扰片段g RNA(sg RNA-1、sg RNA-2及sg RNA-3)接入表达载体进行转化,经DAPI染色鉴定转染、获得HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞;采用马酸替诺福韦(TDF)和干扰素-α(IFN-α)处理HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞,取上清液、采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HBs Ag、HBcr Ag的含量,RT-PCR方法检测HBV DNA、pg RNA水平。结果 成功构建HBV g RNA,sg RNA-3作用最强;成功获得HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞,Cas9/sg RNA定位于细胞核;与对照组细胞比较,HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞HBV复制水平降低(P <0. 05),TDF或IFN-α处理HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞能有效增强抗病毒效应(P <0. 05),且IFN-α处理的细胞更能抑制HBV RNA和HBs Ag的分泌。结论 Cas9/sg RNA靶向HBV DNA切割能抑制HBV病毒的复制,传统抗病毒药物或免疫调节剂能使该作用增强。
关键词(KeyWords)：
乙型肝炎病毒;抗病毒治疗;CRISPER/Cas9;病毒复制;临床治愈;基因编辑
基金项目(Foundation):
作者(Author):
龙黎,罗新华,张茜
参考文献(References)：
文章评论(Comment)：
|
||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||