张捷,何军,熊浪,陈道慧,彭宁,黎婷婷,任真奎,禹文峰,吴昌学

摘要(Abstract)：

目的 探索在β-淀粉样蛋白(Aβ)寡聚体处理的BV2小胶质细胞模型中α7烟碱型乙酰胆碱受体的激动剂PNU282987(PNU)对Seipin蛋白表达及其介导自噬的影响。方法 采用CCK8法检测不同浓度Aβ处理的BV2细胞的存活率筛选Aβ浓度;设置正常组(未做任何处理)和Aβ组(Aβ孵育24 h),采用Western blot法检测细胞经Aβ处理后Seipin蛋白的表达水平;设置Aβ组(Aβ孵育24 h)、Aβ+PNU组(先加入PNU处理18 h、再加入Aβ孵育24 h),采用Western blot法检测Aβ的表达水平;设置正常组(未做任何处理)、PNU组(PNU处理18 h),采用Western blot检测Seipin、自噬标志物微管相关蛋白1轻链3 (LC3)和Beclin-1的表达;将合成的RNAi慢病毒感染BV2细胞,设置阴性对照组(Negative control,NC)、靶向Seipin小干扰RNA(Small interfering RNA; si-Seipin)组,观察Seipin被干扰情况;设置NC+Aβ组(加入NC和Aβ共同孵育)、NC+Aβ+PNU组(加入NC、Aβ和PNU共同孵育)及si-Seipin+Aβ+PNU组(加入si-Seipin、Aβ和PNU共同孵育),采用Western blot检测Aβ和LC3的表达。结果 CCK8结果显示随着Aβ浓度的增加,BV2细胞存活率逐渐降低,浓度为10μmol/L时、细胞存活率为70%,故选择该Aβ浓度为造模浓度; Western blot结果显示,与正常组相比,Aβ处理的BV2细胞Seipin蛋白表达水平下降(P <0. 05);与Aβ组相比,Aβ+PNU组BV2细胞中Aβ蛋白表达水平明显减少(P <0. 05);与正常组相比,PNU组BV2细胞中Seipin、LC3-Ⅱ和Beclin-1表达水平升高(P <0. 05);与NC组相比,si-Seipin组BV2细胞中Seipin蛋白水平下降(P <0. 05);与NC+Aβ组相比较,NC+Aβ+PNU组BV2细胞中Aβ表达水平明显降低、LC3-Ⅱ表达水平明显升高(P <0. 01);与NC+Aβ+PNU组比较,si-Seipin+Aβ+PNU组BV2细胞中Aβ表达水平明显升高、LC3-Ⅱ表达水平明显降低(P <0. 01)。结论 Aβ处理BV2细胞后Seipin降低,PNU能够抑制Aβ的表达,其机制可能与PNU上调Seipin增强BV2细胞的自噬、降解Aβ有关。

关键词(KeyWords)： BV2小胶质细胞;β-淀粉样蛋白;自噬;阿尔兹海默病;PNU282987;Seipin

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作者(Author): 张捷,何军,熊浪,陈道慧,彭宁,黎婷婷,任真奎,禹文峰,吴昌学

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