贵州医科大学学报

JOURNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE

 


  • 贵州燃煤污染型地方性砷中毒研究进展与展望

    张爱华,姚茂琳

    砷暴露是一个全球性公共卫生问题,目前全世界有超过 2亿人口的饮用水砷含量超标,主要分布于印度、孟加拉国、美国、智利、中国及加纳等地;而生活在特定地区的居民因长期使用无排烟设施的炉灶燃用高砷煤后造成室内空气和食物污染所致的燃煤污染型地方性砷中毒(以下简称燃煤型砷中毒),是目前世界上仅存于我国贵州和陕西两省的特殊地方性砷中毒病型,现症患者 1.64万人,受威胁人口约 145万人[1-2]。贵州燃煤型砷中毒是发现最早且病情最重的病区,主要分布在兴仁、兴义、安龙、织金等 4县(市)的 26个行政村,突出危害是全身多脏器或系统损害及多发性癌症,严重影响病区经济社会发展。[2]1992年政府将其正式纳入地方病管理,投入大量资源在病区实施以健康教育为基础,禁采高砷煤和改良炉灶为主、其他相关措施为辅的综合防控措施,其病因防控取得举世瞩目的成就。以贵州医科大学为主的联合课题组在国家自然科学基金和部省级基金的支持下,持续20余年利用宝贵的砷中毒人群资源,结合动物和体外细胞研究,从该病的流行因素、健康损害、致病机制、防治措施等方面开展了较系统研究。本文总结相关研究结果,结合国内外相关研究进展,分析存在问题,为新形势下地方性砷中毒防控策略的优化提供参考。

    2018年10期 1-7页 [查看摘要][在线阅读][下载 1111K]
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  • 综合治理后贵州省燃煤型地氟病区人群健康状况研究进展

    官志忠,吴昌学,齐晓岚

    地方性氟中毒(endemicfluorosis)简称地氟病,是严重危害人体健康的全身性疾病。地氟病主要存在 3种类型,即饮水型氟中毒、燃煤污染型氟中毒和饮茶型氟中毒[1]。我国和印度是国际上地氟病流行范围最广、损害程度最重的国家,燃煤型地氟病主要发生在我国中西部 13个省、市、区,受威胁人口 3430万人。贵州省是世界上人口最多、病区最集中、病情最重的燃煤型地氟病区,曾经因病致贫现象十分严重[2],通过多年的改良炉灶和健康教育等综合治理措施,燃煤型地氟病的危害已得到基本控制。为了评价病区综合治理后人群健康状况,贵州地氟病研究及防治工作者选择毕节市和六盘水市(燃煤型地氟病重病区)经综合治理后的地氟病区人群,通过知情同意协议,检查其临床表现、测定血液和尿液相关生化指标、进行骨影像学、神经、心血管、泌尿、消化、呼吸等系统的检查,并以非氟病区人群作为对照,对综合治理后的病区患者健康恢复状况进行调查,工作取得较大的进展,现对调查结果进行综合评述。

    2018年10期 1-4页 [查看摘要][在线阅读][下载 789K]
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  • 刺梨的营养保健功能及其开发利用研究进展

    夏仕青,张爱华

    刺梨(rosaroxbughiitratt)别名刺石榴、缫丝花,是蔷薇科植物缫丝花的果实,主要分布于我国贵州、云南、湖南等省份,其中尤以贵州资源最为丰富。刺梨作为贵州省区域重点食药两用植物资源正在被大力研发,已获得“龙里刺梨”、“盘县刺梨果脯”和“龙里刺梨干”3个国家地理标志产品保护[1]。刺梨富含维生素 C、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、黄酮及多种微量元素,具有较高的食药价值,极具开发潜力[2]。近年来,已有多种以刺梨为主要原料制成的中成药及营养保健品问市,如金刺参九正合剂、纯天然植物刺梨汁、刺梨保健茶等。有研究显示,刺梨制剂具有抗氧化、免疫调节、抗动脉粥样硬化、抗癌等多种保健药用功能[3],为了进一步研究开发刺梨的食药价值、挖掘和拓展刺梨产品的应用,本文总结了刺梨的营养特点及其保健功能,综述近年刺梨产品开发与利用的研究进展。

    2018年10期 1-5页 [查看摘要][在线阅读][下载 781K]
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  • 三氟甲基化试剂研究概况

    崔晶,曾晓萍,梁光义,徐必学

    氟原子由于其独特的电子结构,它具有最强的电负性(4.0)和与氢原子一般大小的原子半径(1.47A),以及很强的 C-F键 (平均大约 116kcal/moL)等,这些化学特性使得氟原子取代某一化合物中的其他原子往往会对其物理、化学、生物活性等性质产生极大的改变,将三氟甲基引入有机分子可以改变其亲脂性、酸性、偶极矩、脂溶性、以及代谢稳定性和生物利用度等物理、化学及其生物学性质。这使得含氟化合物在许多领域,特别是在医药领域得到了广泛应用。2011年至 2016年 1月,美国 FDA共批准新药 188个,其中含氟药物 42个,占比为 22.34%。特别是引入三氟甲基 (CF3)基团后,由于CF3具有很强的电负性、亲脂性和高稳定性,可以发生一系列总体正效应,例如使它们更具选择性,增强功效。在 2001年至 2016年期间超过 40种新的含三氟甲基药物引入市场。部分含有三氟甲基的代表药物结构式如图1。本文将依据三氟甲基化反应机理,分别对亲电反应、亲核反应和自由基反应 3种类型的三氟甲基化试剂进行简要概述。

    2018年10期 1-10页 [查看摘要][在线阅读][下载 3513K]
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  • RAAS与心肌重塑及药物干预进展

    蒋朝晖,付凌云,罗红,沈祥春

    近年来,心力衰竭(heartfailure,HF)的发生率及致死率呈逐年上升趋势。HF是绝大多数心血管系统疾病的共同终末阶段,而心肌重塑(myocardialremodeling,MR)是其关键病理因素。MR是为了维持正常输出,心脏在应对压力负荷时的一种适应性反应,其主要病理表现为心肌肥厚、纤维化及电传导信号异常等,最终导致心衰发生。目前认为肾素-血管紧张素 -醛固酮系统(Reninangiotensinaldosteronesystem,RAAS)是 MR的核心危险因素之一,其效应分子血管紧张素Ⅱ(angiotensinII,AngⅡ)和醛固酮(aldosterone,ALD)可诱导心肌细胞损伤、心肌细胞肥大,心肌间质重构等,导致不良MR的发生;不良 MR是心血管系统疾病死亡率增加的独立危险因素,可造成心肌结构和功能的改变。预防和逆转 MR是治疗心血管系统疾病的重要途径,寻找安全高效的预防和逆转 MR的药物已成为医药研究工作的焦点之一。AngⅡ受体拮抗剂(angⅡreceptorantagonist,ARB)、血管紧张素转换酶抑制剂 (angiotensinconvertingenzymeinhibitor,ACEI)、直接肾素抑制剂、ALD拮抗剂、钙通道阻滞剂(calciumantagonists,CCBs)、抗氧化剂等药物可以改善不良 MR,临床应用靶向 RAAS的药物干预 MR时效果良好。本文就 MR主要发生机制,RAAS致 MR信号通路以及靶向药物干预研究进行综述。

    2018年10期 1-6页 [查看摘要][在线阅读][下载 954K]
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  • PPARγ激动剂对抗经氟诱导的SH-SY5Y神经细胞氧化损伤

    刘仙 红,陈丹,曾晓晓,董阳婷,邓婕,齐晓岚,吴昌学,李毅,宋辉,官志忠

    目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂15d-PGJ2对氟诱导人神经母瘤SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响。方法:将体外培养的SH-SY5Y细胞,分为对照组、染氟组(NaF组)、单纯PPARγ激动剂组(R组)、干预组(R+NaF组,先加入15d-PGJ22h后再加NaF),各组处理后培养48h,用蛋白印记法检测SH-SY5Y细胞中PPARγ蛋白表达水平,微量酶标法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,分析PPARγ蛋白与SOD活性及MDA含量的相关关系。结果:与对照组相比,R组SH-SY5Y细胞中PPARγ蛋白水平、SOD活性及MDA含量无明显改变(P>0.05),NaF组SHSY5Y细胞PPARγ蛋白水平和SOD活性明显降低,MDA含量明显增加(P<0.05);R+NaF组SH-SY5Y细胞中PPARγ蛋白表达水平及SOD活性明显高于NaF组、MDA含量明显低于NaF组(P<0.05);SH-SY5Y细胞中PPARγ蛋白表达水平与SOD活性呈正相关关系(r=0.771,P<0.05),与MDA含量呈负相关关系(r=-0.762,P<0.05)。结论:过量氟会导致体外培养的SH-SY5Y细胞发生氧化损伤,而PPARγ激动剂15dPGJ2处理后可减轻氟诱导的细胞氧化损伤。

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  • 慢性氟中毒大鼠学习记忆能力与血清、海马及皮质脑组织中PGC-1α水平的相关性

    刘仙红,陈丹,曾晓晓,董阳婷,邓婕,齐晓岚,吴昌学,李毅,宋辉,官志忠

    目的:研究慢性氟中毒大鼠脑组织中过氧化物酶体增殖激活受体γ辅激活因子(PGC-1α)水平,探讨PGC-1α与学习记忆能力的关系。方法:SD大鼠60只,随机分为对照组(饮水含氟量<0.5mg/L)、低氟组(饮水含氟量为5.0mg/L)、高氟组(饮水含氟量为50.0mg/L),染氟时间分别为3个月及6个月;分别于染氟3月及6月时,用Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力,采用氟离子选择电极法测定大鼠血清氟含量,用蛋白印记方法检测大鼠海马及皮质组织中PGC-1α蛋白表达水平,分析大鼠海马及皮质PGC-1α蛋白水平与血清氟含量及空间学习记忆能力的相关性。结果:染氟大鼠逃避潜伏期较对照组显著延长、穿越平台次数及逗留平台象限时间明显缩短,以染氟6月组大鼠更明显(P<0.05);血清氟含量随着染氟浓度的增高及染氟时间的延长而升高,高氟组大鼠血氟含量显著高于对照组,以染氟6月组大鼠尤为明显(P<0.05);染氟大鼠海马区和皮质区的PGC-1α蛋白表达水平随着染氟浓度的增加和染氟时间的延长而逐渐下降,染氟6月组大鼠海马及皮质PGC-1α蛋白与血氟含量呈负相关(r=-0.574、-0.516,P<0.05)、与大鼠逗留平台象限时间呈正相关(r=0.76、0.60,P<0.05)、与逃避潜伏期呈负相关(r=-0.542、-0.58,P<0.05)。结论:慢性氟中毒大鼠大脑组织PGC-1α蛋白表达水平降低,可能是氟中毒大鼠空间学习记忆能力降低的机制之一。

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  • 燃煤污染型砷中毒人群血清C反应蛋白和α-L-岩藻糖苷酶水平与砷致皮肤损害的相关性

    王大朋,邹忠兰,张彤;胡昭宇,叶萍,张碧霞,刘桂成,黄晓欣,张爱华

    目的:分析燃煤型砷中毒病区不同程度皮肤损害患者血清C反应蛋白(CRP)及α-L-岩藻糖苷酶(AFU)水平及相关性。方法:符合《地方性砷中毒诊断标准》(WS/T211-2001)及经临床复查确诊的392例砷中毒患者,根据皮肤损害程度分为轻度砷中毒组(n=174)、中度砷中毒组(n=121)及重度砷中毒组(n=97),另选择离病区12km以外无燃用高砷煤史、且生活方式相近的健康人群作为对照组(n=103);采用免疫比浊法检测受检者血清CRP水平,CPNP-α-Fucoside速率法检测受检者血清AFU水平,记录各组血清CRP、或AFU水平超标率;采用Pearson检验分析砷中毒患者血清CRP与AFU的相关性。结果:血清CRP水平比较,中度砷中毒组、重度砷中毒组高于对照组及轻度砷中毒组,差异有统计学意义(P<0.05);血清AFU水平比较,重度砷中毒组高于对照组、轻度砷中毒组及中度砷中毒组,差异有统计学意义(P<0.05);各砷中毒组患者血清CRP、AFU超标率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);且两项指标的超标率随着砷中毒皮肤病变的加重呈逐渐升高趋势;中度砷中毒组、重度砷中毒组患者血清CRP超标率高于轻度砷中毒组,差异有统计学意义(P<0.05);砷中毒病区人群血清CRP水平与AFU水平之间呈明显正相关(r=0.210,P<0.05)。结论:燃煤砷暴露可导致人群血清CRP和AFU水平升高,其升高与砷致皮肤损害程度密切相关。

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  • 综合防控9年后贵州燃煤型砷中毒患者肝损害情况分析

    邹忠兰,王庆陵,王祺,李成贵,张爱华

    目的:追踪调查贵州雨樟燃煤型砷中毒患者肝损害情况,分析综合防控9年后砷中毒患者肝生化指标随病情的改变情况。方法:以贵州雨樟燃煤型砷中毒病区为调查点,按《地方性砷中毒诊断标准》(WS/T211—2001)确定362例砷暴露者,按皮肤损伤程度分为病区非病人组(n=81)和砷中毒组(n=281),砷中毒组再分为轻度砷中毒组(n=97)、中度砷中毒组(n=100)及重度砷中毒组(n=84);以相邻生活习惯和经济条件与病区人群相近的63名非砷暴露者居民为对照组,采用生物化学法检测调查对象清晨空腹血清中血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)、胆碱酯酶(CHE)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰胺转移酶(γ-GT)、总胆汁酸(TBA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平及A/G值,并计算其超标率。结果:与对照组比较,病区非病人组ALB含量显著降低(P<0.05),砷中毒组ALB、TP含量和A/G显著降低(P<0.05),TBA、ALP和γ-GT含量显著升高(P<0.05);与病区非病人组比较,砷中毒组ALB、TP含量和A/G显著降低(P<0.05),TBA和ALP含量显著升高(P<0.05);PA、CHE、AST、ALT活性在各组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,病区非病人组及轻、中、重度砷中毒组ALB含量显著降低(P<0.05),轻、中、重度砷中毒组TP含量和A/G显著降低、TBA和ALP含量显著升高(P<0.05),γGT在中、重度砷中毒组显著升高(P<0.05);与病区非病人组比较,各砷中毒组ALB含量和A/G显著降低,TBA含量显著升高(P<0.05),中、重度砷中毒组TP含量显著降低(P<0.05),重度砷中毒组ALP含量显著升高(P<0.05);病区非病人组血清TP、CHE、AST、ALT、ALP和γ-GT超标率高于对照组,砷中毒患者血清TP、ALB、A/G、ALP、TBA、γ-GT、PA和AST超标率高于对照组。结论:综合防控9年后,贵州燃煤型砷中毒病区的非砷中毒病人肝功能有所好转,但砷中毒患者部分指标仍超过临床正常参考范围。

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  • 辛芍抗脑缺血再灌注损伤的拆方研究

    陆定艳,李靖,董莉,刘宗炎,王爱民,刘亭,林昌虎

    目的:研究辛芍组方中灯盏细辛、赤芍单方对脑缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性(灯盏花素)组、灯盏细辛组、赤芍组,术前7d给予相应药物处理,模型组、阳性组、灯盏细辛组及赤芍组大鼠采用线栓法建立大鼠中动脉缺血再灌注损伤模型(MCAO),假手术组及模型组给予等量生理盐水;缺血2h再灌注22h后对大鼠进行神经行为学评分,观察脑梗死体积比,取血测定血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、总一氧化氮合酶(TNOS)的含量;HE染色观察脑组织海马CA1区病理形态学变化,免疫组织化学法测定海马CA1区Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达。结果:与模型组相比,两个单方均能不同程度改善大鼠神经行为学评分(P<0.05),减小脑梗死体积(P<0.05),血清SOD和GSH-PX活力增加(P<0.05或P<0.01)、MDA含量降低(P<0.05),iNOS和TNOS活力降低(P<0.05)、NO含量降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01)、Bax和Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01)。结论:灯盏细辛和赤芍单方可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,其机制可能与其减轻自由基损伤及提高Bcl-2蛋白表达有关。

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  • 乳没活络散微生物限度检查方法适用性研究

    陆定艳,杨健,宋菲,李勇军,王永林,王爱民,刘亭,林昌虎

    目的:建立乳没活络散微生物限度的检查方法。方法:按《中国药典》2015年版四部通则微生物限度检查方法,采用平皿法对乳没活络散的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉进行回收率测定,常规检测方法对制剂控制菌进行试验。结果:通过平皿法和常规检测方法,乳没活络散试验菌种的回收率均达到70%以上,且都可以检测出控制菌,符合验证要求。结论:平皿法和常规检测方法可以用于乳没活络散的微生物限度检查。

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  • FLASH基因在野生型斑马鱼早期表达以及与HoxB4基因的关系

    金璐,丁可军,孙琮杰,陈露,周艳华,舒莉萍,何志旭

    目的:观测FLASH基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎早期的表达及与HoxB4基因的关系。方法:以HoxB4转基因斑马鱼系为研究对象,分为实验组、实验对照组和空白对照组,实验组为HoxB4转基因斑马鱼系与Cre鱼系交配所得的过表达HoxB4的带有EGFP荧光的胚胎(Tg:Lmo2-Cre,Lmo2-LDEL-Hoxb4-EGFP),实验对照组为EGFP转基因斑马鱼系与Cre鱼系交配所得的表达EGFP荧光的胚胎(Tg:Lmo2-Cre,Lmo2-LDEL-EGFP),空白对照组为Tuebingen野生型斑马鱼的胚胎;采用FLASH反义mRNA探针做原位杂交并观察其表达。结果:观察到Tuebingen组中3.7、9~24hpf的神经外侧板、头部和脊索及18~30hpf的原肾管可见黑色的阳性杂交信号,36hpf后未见;18~72hpf的空白对照组与实验对照组间FLASH表达水平无差异,实验组18~30hpf神经系统、造血系统FLASH的表达下调。结论:FLASH基因可能是HoxB4基因的下游靶基因。

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  • 尾静脉注射BMP-7过表达质粒在小鼠脏器中的表达

    彭伟,刘慧铭,梁露群,伍聪聪,徐卫卫,周星丞,王圆圆,刘丽荣,桂华珍,郭兵

    目的:研究尾静脉注射骨形成蛋白7(BMP-7)过表达质粒在小鼠心、肝、肺和肾脏组织中的表达及其安全性。方法:将30只小鼠随机分为正常组(NC组)、空载质粒组(NC+Vector组)以及BMP-7过表达质粒组(NC+BMP-7组),NC+BMP-7组和NC+Vector组分别通过尾静脉注射BMP-7过表达质粒或空载质粒,每周1次共注射6周,6周后处死小鼠取动脉血,检测血清中小鼠胆固醇、甘油三酯和血糖含量,收集小鼠心、肝、肺和肾脏组织,采用HE染色观察小鼠肝脏和肾脏组织形态变化,试剂盒比色法检测肝组织中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力,WesternBlot检测各组织中BMP-7表达。结果:与NC组比较,NC+Vector组和NC+BMP-7组小鼠胆固醇、甘油三酯和血糖无明显变化,肝、肾组织显微镜观察无明显形态学改变,肝组织中AST和ALT的活力无明显增高,但小鼠心、肝、肺和肾脏组织中BMP-7蛋白明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:通过尾静脉注射BMP7过表达质粒可以在小鼠心、肝、肺和肾脏中高表达,且不具有明显的肝、肾毒性。

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  • 登革2型病毒对人血管内皮细胞自噬的影响

    杨杨,左丽

    目的:研究登革2型病毒NGC株(DEN2)感染人血管内皮细胞(HUVEC)后对HUVEC自噬的影响。方法:采用免疫组织化学法检测Ⅷ因子表达,鉴定HUVEC,50%组织细胞感染量(TCID50)测定DEN2NGC株对白纹伊蚊C6/36细胞的毒力,实时荧光定量PCR检测感染DEN2的HUVEC中病毒mRNA表达水平的变化,Western-blot检测DEN2感染对HUVEC自噬标记性蛋白LC3B表达的影响,激光共聚焦显微镜观察DEN2感染HUVEC自噬现象。结果:免疫组织化学法结果显示,细胞表达Ⅷ因子,符合HUVEC特点;接种DEN2后5~7dC6/36细胞出现肿胀、融合、产生空泡等典型的细胞病变,TCID50为10-5.6;随着感染DEN2量增加,HUVEC中DEN2mRNA相对表达量呈上升趋势,在加入1×104TCID50病毒量时DEN2mRNA相对表达量最高(P<0.05);用巴伐洛霉素A1(Baf)抑制后,与未用Baf相比,相同TCID50DEN2感染HUVEV后DEN2mRNA表达减少(P<0.05)。Western-blot结果显示,与空白对照组比较,1×102、1×103、1×104TCID50DEN2感染组LC3BⅡ/Ⅰ比值升高,LC3BⅡ、Ⅰ条带灰度值增加(P<0.05);用Baf抑制后,与未用Baf相比,1×102、1×103、1×104TCID50DEN2感染组LC3BⅡ/Ⅰ比值上高,LC3BⅡ、Ⅰ条带灰度增加(P<0.05)。激光共聚焦扫描显微镜检测结果显示,在正常HUVEC胞浆内有LC3B(绿色荧光)及LAMP1(红色荧光),荧光融合后绿色、红色荧光重叠;用Baf抑制后,HUVEC胞浆内绿色红色荧光强度增加,荧光融合后绿色、红色荧光重叠部分减少;与正常HUVEC相比,1×104TCID50DEN2感染组HUVEC胞浆内可观察到绿色、红色及橘黄色荧光(DEN2NS1),绿色、红色荧光强度增加,在荧光融合后绿色、红色与橘黄色荧光重叠。结论:HUVEC在DEN2感染后24h,随着感染量增加,病毒载量增加,加Baf抑制后DEN2增殖被抑制;DEN2感染HUVEC后,在胞浆内DEN2NS1与LC3B、溶酶体标记蛋白LAMP1共定位;DEN2可诱导HUVEC自噬增强,Baf可抑制DEN2感染HUVEC自噬的发生。

    2018年10期 1-9页 [查看摘要][在线阅读][下载 15013K]
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  • 抗乙肝候选新药替芬泰代谢产物M8和M9的合成工艺研究

    杨方红,曾晓萍,徐峰,梁光义,徐必学

    目的:对马蹄金素衍生物(研发代号Y101)代谢产物M8、M9的合成工艺进行优化并制备合格样品。方法:以L-酪氨酸甲酯盐酸盐为原料,设计不同的合成工艺,经过酰化、水解、苄基化、烷基化、催化氢化、N-氧化等反应合成替芬泰的主要代谢产物M8、M9,所得化合物经1HNMR,13CNMR,ESI-MS进行结构确证,并用高效液相色谱对其进行分析检测。结果:完成了M8、M9合成工艺路线的选择与优化,制备了合格的M8和M9样品。结论:优选的合成工艺制备所得的M8、M9样品纯度达到了95%以上。

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  • OMT抑制钙调神经磷酸酶改善醛固酮诱导的心肌成纤维细胞增殖

    付凌云,蒋朝晖,罗红,沈祥春,甘诗泉

    目的:观察氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖分化模型的干预作用,探讨其对钙调神经磷酸酶(CaN)表达的影响。方法:采用胰酶消化法、差速贴壁法获得体外培养1~3d新生SD乳鼠CFs,建立ALD诱导CFs增殖模型,采用波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学法鉴定CFs;将鉴定并传代的2~3代CFs分为对照组(等量蒸馏水)、ALD组(1×10-7mol/L)、OMT组(1×10-7mol/LALD及7.56×10-4mol/LOMT)及CaNI组[1×10-7mol/LALD及CaN抑制剂环孢素A(CsA1)],作用24h;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定CaNmRNA水平,Westernblot法测定CaN蛋白表达水平。结果:Vimentin鉴定分离培养的细胞结果阳性,提示分离细胞为CFs;ALD诱导24h时,与对照组比较,ALD组CaNmRNA及CaN蛋白的表达水平升高(P<0.01);与ALD组比较,OMT组CaNmRNA及CaN蛋白的表达水平降低(P<0.01)。结论:OMT能够抑制ALD诱导的CFs增殖,其机制可能与抑制CaN基因表达有关。

    2018年10期 1-6页 [查看摘要][在线阅读][下载 8319K]
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  • 抗RecQ解旋酶单克隆抗体6H5在几种肿瘤细胞中的初步应用

    张荣红,廉芳,周孟,贾铁文,何志旭,刘杰麟

    目的:制备抗RecQ解旋酶单克隆抗体(6H5抗体),鉴定其生物学特性并开展其对肿瘤细胞及肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的检测。方法:在Balb/c小鼠腹腔接种杂交瘤细胞6H5后收集腹水,ELISA法鉴定腹水中6H5抗体,间接免疫荧光技术检测6H5抗体与乳腺癌细胞MDA-MB-435、人肾癌细胞GRC-1、人舌癌细胞Tca8113中BLM、RecQ4和RecQ5的结合;以6H5抗体作为一抗,免疫组织化学染色法分析Jurkat、MDA-MB-435肿瘤细胞及肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的表达水平。结果:经鉴定,小鼠腹水中6H5抗体阳性,该抗体能识别不同肿瘤细胞株中的BLM、RecQ4和RecQ5解旋酶,还可敏锐检测Jurkat、MDA-MB-435肿瘤细胞与肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的表达;RecQ解旋酶在Jurkat肿瘤干细胞中表达水平明显高于Jurkat肿瘤细胞,而在MDA-MB-435肿瘤干细胞表达水平则低于MDA-MB-435肿瘤细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RecQ家族解旋酶可以作为多种肿瘤细胞及肿瘤干细胞表面标志物的备选指标。

    2018年10期 1-8页 [查看摘要][在线阅读][下载 74217K]
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  • 结肠癌组织中BLM、RECQ4的表达水平及其临床意义

    郑艺,刘杰麟,韩莹,冯江龙

    目的:检测结肠癌组织中BLM解旋酶和RECQ4解旋酶的表达水平,分析其与结肠癌临床病理特征的关系。方法:选取手术切除的结肠癌组织及其癌旁结肠组织标本54对,采用免疫组织化学染色的方法检测结肠癌组织及癌旁组织中BLM及RECQ4蛋白的表达,比较不同TNM临床分期和分化程度的结肠癌患者癌组织中BLM和RECQ4蛋白水平。结果:BLM和RECQ4蛋白在结肠癌及癌旁组织中均有表达,但在癌组织中BLM和RECQ4蛋白表达水平高于癌旁组织(P<0.05);BLM和RECQ4蛋白在Ⅲ期结肠癌组织中的表达水平高于Ⅱ期和Ⅰ期结肠癌组织(P<0.05),低分化结肠癌组织中BLM和RECQ4蛋白的表达水平高于中分化和高分化结肠癌组织(P<0.05)。结论:BLM和RECQ4在结肠癌组织中高表达,且与TNM临床分期和组织病理学分型相关,可作为结肠癌诊断和预后判断的指标。

    2018年10期 1-5页 [查看摘要][在线阅读][下载 3739K]
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  • HPV基因芯片检测质控点设计和参数优化研究

    兰金芝,刘扬,徐澍,张金娟,王欢,肖俊,江银辉,陈腾祥

    目的:设计人乳头状瘤病毒(HPV)基因芯片的质量控制点,优化质量控制探针和人β珠蛋白基因引物浓度以及HPV引物浓度比例,以提高基因芯片的检测质量。方法:收集临床HPV患者宫颈刮片样本,提取样本HPV58的DNA,用HPV通用引物扩增病毒DNA;利用人β珠蛋白引物扩增样本中的β珠蛋白DNA,将扩增的PCR产物与线性化的pMD18-T载体连接,构建人β珠蛋白和HPV58L1区DNA质粒,转化大肠杆菌后,进行单克隆培养,获得HPV58样本和人β珠蛋白的DNA模板;以HPV58和人β珠蛋白DNA基因信息设计并制备扩增HPV和人β珠蛋白探针及PCR引物,将人β珠蛋白基因探针固定于基因芯片作为质量控制点(QC),按1∶20、1∶10、1∶5和1∶4比例混合单克隆HPV扩增引物与人β珠蛋白扩增引物,采用PCR反向点杂交技术,对模板进行扩增后,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物的产量,进行基因芯片孵育杂交和显色;用扫描仪扫描芯片,采用ImageJ软件对各阳性杂交信号点进行信号强度采集,计算最佳的人β珠蛋白扩增引物和HPV扩增引物浓度比值;将QC的探针点样浓度设为0.1pmol/L、1pmol/L、10pmol/L、50pmol/L和100pmol/L,检测信号强度,优化质量控制探针点样浓度。结果:扩增了HPV58病毒DNA和人β珠蛋白的DNA模板,设计了HPV58和人β珠蛋白探针及PCR引物;琼脂糖凝胶电泳检测分析发现,当人β珠蛋白扩增引物与HPV扩增引物的浓度比例为1∶10时,二者同时PCR扩增时,扩增的强度较为一致,得到的产物量相当,用此引物浓度比例进行PCR获得的产物与测试芯片进行杂交,显色的平衡性较好;对QC的点样浓度进行测试发现,当QC点样探针浓度为50pmol/L时,可以获得最佳的检测效果。结论:通过对β珠蛋白扩增引物与HPV扩增引物的最佳浓度比例和质量控制探针最佳点样浓度的优化,提高了HPV检测点的检测质量。

    2018年10期 1-6页 [查看摘要][在线阅读][下载 32347K]
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  • IL21基因多态性与云南汉族人群非小细胞肺癌的相关性

    赵淦,李盈甫,马千里,陈楠,谭芳,周紫云,赵雨笛,陈珺,刘楠楠,梁燕

    目的:研究IL21基因中单核苷酸多态性(SNPs)位点rs2221903、rs12508721和rs907715与云南汉族人群非小细胞肺癌易感性的关系。方法:采用TaqMan探针基因分型的方法对437例非小细胞肺癌患者(病例组)和602例健康对照人群(对照组)的IL21基因SNPs位点rs2221903、rs12508721和rs907715进行基因分型,并分析其等位基因和基因型在病例组和对照组中的分布特征;根据连锁不平衡结果构建单倍型,并分析各单倍型在病例组和对照组中分布频率。结果:rs2221903位点等位基因C在病例组中的分布频率高于对照组(P=0.016),该位点等位基因C可能会增加云南汉族人群非小细胞肺癌的患病风险(OR=1.41,95%CI为1.07~1.85);单倍型结果分析显示单倍型rs2221903C-rs12508721C-rs907715C可能增加非小细胞肺癌的患病风险(OR=1.42,95%CI为1.07~1.87),单倍型rs2221903T-rs12508721C-rs907715C可能与非小细胞肺癌患病风险降低有关(OR=0.58,95%CI为0.39~0.85);而rs12508721和rs907715位点等位基因和基因型在对照组和病例组的分布频率的差异无统计学意义(P>0.05);结论:IL21基因中多态性位点rs2221903位点等位基因C可能会使云南汉族人群非小细胞肺癌患病风险增加。

    2018年10期 1-5页 [查看摘要][在线阅读][下载 795K]
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  • 无细胞百日咳疫苗生产用培养基的改进和培养条件优化

    梁疆莉,姬秋彦,罗娜,姬光,高娜,马艳,史荔,孙明波,衡燮

    目的:改进无细胞百日咳疫苗生产用培养基并优化培养条件。方法:用不同浓度溶血(0.1%)赫氏琼脂及酸水解酪蛋白制备百日咳活性炭培养基,选择最优培养条件;使用百日咳活性炭培养基成功复苏菌种后,优化传代代次和培养时间,评价百日咳活性炭培养基替代羊血包姜氏培养基的可行性;用酸水解酪蛋白代替自制50%酸水解酪蛋白制备改良SS液体培养基,并用ELISA、SDS-PAGE电泳和CHO细胞簇集等方法评价对菌种的培养效果。结果:溶血(0.1%)赫氏琼脂的加入量为33.2g/L、酸水解酪蛋白加入量为8g/L时,菌苔生长最快;百日咳活性炭培养基培养第1代72h、第2代48h、第3代48h、第4代24h和第1代72h、第2代36h、第3代24h的血凝(HA)和UV600均较高,这两组细菌生长状态较好;酸水解酪蛋白制备的百日咳活性炭培养基在优化条件后复苏菌种生长良好,和羊血包姜氏培养基没有明显差异;8g/L酸水解酪蛋白制备的改良SS液体培养基所得菌量优于50%酸水解酪蛋白制备培养基(P=0.001),改良SS液体培养基培养所得百日咳毒素纯度、产量和CHO细胞簇集活性均较好。结论:使用酸水解酪蛋白的百日咳活性炭培养基和改良SS液体培养基所得的百日咳杆菌纯度、产量、活性均较高,适用于无细胞百日咳组分疫苗的生产。

    2018年10期 1-5页 [查看摘要][在线阅读][下载 1989K]
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  • 培养基、接种菌量和pH值对破伤风梭状芽孢杆菌产毒的影响

    高娜,衡燮,姬秋彦,梁疆莉,顾琴,马艳,史荔,孙明波

    目的:探讨培养基、接种菌量与pH值对破伤风梭状芽孢杆菌产毒的影响。方法:采用示胨三号、示胨二号、胃蛋白胨及自制肉汤4种培养基培养破伤风梭状芽孢杆菌,比较毒素产量;选择最优培养基,按照培养基体积的1%,2%,3%,4%接种破伤风梭状芽孢杆菌,培养160h,选取合适接种菌量;使用最优培养基与接种量,分别用初始pH7.5、7.2、7.0的3种培养基培养破伤风梭状芽孢杆菌,比较毒素产量。结果:示胨三号产毒量优于其他3种蛋白胨,差异具有统计学意义(P<0.05);接种菌量大于2%时产毒量最优,3种初始pH培养条件对产毒量无明显影响(P>0.05)。结论:初步筛选出最优破伤风毒素培养基及接种量,为破伤风疫苗工艺研究及扩大化生产提供依据。

    2018年10期 1-3页 [查看摘要][在线阅读][下载 846K]
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