贵州医科大学学报

2018, (10) 1-9

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登革2型病毒对人血管内皮细胞自噬的影响

杨杨,左丽

摘要(Abstract):

目的:研究登革2型病毒NGC株(DEN2)感染人血管内皮细胞(HUVEC)后对HUVEC自噬的影响。方法:采用免疫组织化学法检测Ⅷ因子表达,鉴定HUVEC,50%组织细胞感染量(TCID50)测定DEN2NGC株对白纹伊蚊C6/36细胞的毒力,实时荧光定量PCR检测感染DEN2的HUVEC中病毒mRNA表达水平的变化,Western-blot检测DEN2感染对HUVEC自噬标记性蛋白LC3B表达的影响,激光共聚焦显微镜观察DEN2感染HUVEC自噬现象。结果:免疫组织化学法结果显示,细胞表达Ⅷ因子,符合HUVEC特点;接种DEN2后5~7dC6/36细胞出现肿胀、融合、产生空泡等典型的细胞病变,TCID50为10-5.6;随着感染DEN2量增加,HUVEC中DEN2mRNA相对表达量呈上升趋势,在加入1×104TCID50病毒量时DEN2mRNA相对表达量最高(P<0.05);用巴伐洛霉素A1(Baf)抑制后,与未用Baf相比,相同TCID50DEN2感染HUVEV后DEN2mRNA表达减少(P<0.05)。Western-blot结果显示,与空白对照组比较,1×102、1×103、1×104TCID50DEN2感染组LC3BⅡ/Ⅰ比值升高,LC3BⅡ、Ⅰ条带灰度值增加(P<0.05);用Baf抑制后,与未用Baf相比,1×102、1×103、1×104TCID50DEN2感染组LC3BⅡ/Ⅰ比值上高,LC3BⅡ、Ⅰ条带灰度增加(P<0.05)。激光共聚焦扫描显微镜检测结果显示,在正常HUVEC胞浆内有LC3B(绿色荧光)及LAMP1(红色荧光),荧光融合后绿色、红色荧光重叠;用Baf抑制后,HUVEC胞浆内绿色红色荧光强度增加,荧光融合后绿色、红色荧光重叠部分减少;与正常HUVEC相比,1×104TCID50DEN2感染组HUVEC胞浆内可观察到绿色、红色及橘黄色荧光(DEN2NS1),绿色、红色荧光强度增加,在荧光融合后绿色、红色与橘黄色荧光重叠。结论:HUVEC在DEN2感染后24h,随着感染量增加,病毒载量增加,加Baf抑制后DEN2增殖被抑制;DEN2感染HUVEC后,在胞浆内DEN2NS1与LC3B、溶酶体标记蛋白LAMP1共定位;DEN2可诱导HUVEC自噬增强,Baf可抑制DEN2感染HUVEC自噬的发生。

关键词(KeyWords): 登革2型病毒;感染;人血管内皮细胞;自噬;LC3B;溶酶体标记性蛋白;巴伐洛霉素A1

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(81560263,81860289)

作者(Author): 杨杨,左丽

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