贵州医科大学学报

2017, (12) 1-5

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FuGENE 6 Transfection Reagent及pEGFP-N1-HSF1转染JEG-3细胞条件的优化

杨友辉1,刘香香1,吴琼1,薛维娜1,刘 亭1,陈一飞2,3

摘要(Abstract):

目的:优化FuGENE6 Transfection Reagent(FuGENE)转染质粒pEGFP-N1-HSF1到人绒毛膜癌细胞JEG-3的条件。方法:利用DNA延滞实验考察pEGFP-N1-HSF1质粒与FuGENE试剂的结合力,用不同剂量的FuGENE试剂和质粒转染JEG-3细胞,通过倒置荧光显微镜和血球计数法计算其转染效率,筛选出最佳的转染条件并进行转染,通过qRT-PCR检测HSF1mRNA的水平。结果:DNA延滞实验显示FuGENE和pEGFP-N1-HSF1质粒具有较高的结合力,当质粒量一定时,随着FuGENE量的增加,其转染效率先增加后降低;当FuGENE和质粒比例为2∶1(μL∶μg)时,转染效率最高,达(39.05±1.19)%;当固定转染比例时,随着转染剂量的增加,其转染效率先增加后降低,当转染剂量为250μL时,转染效率最高,达(42.98±2.56)%;qRTPCR结果显示,转染组HSF1mRNA的水平较对照组有显著上调。结论:在转染比例为2∶1,转染剂量为250μL时,对JEG-3细胞有最佳的转染效率。

关键词(KeyWords): 热休克转录因子;氧化应激;绿色荧光蛋白;人绒毛膜癌细胞;转染;DNA延滞实验;质粒;FuGENE

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(81401216,81760699);贵州省科学基金[黔科合 J字(2014)2018号];贵阳市科技计划(联合基金)项目 [(20161001)03];贵州省科学技术厅人才团队项目[黔科合平台人才(2016)5613\5677];贵州省教育厅项目[黔教合协同创新字(2013)04]

作者(Author): 杨友辉1,刘香香1,吴琼1,薛维娜1,刘 亭1,陈一飞2,3

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