贵州医科大学学报

2018, (05) 1-5

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敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建

黄晏军,郑艺,汤长宁,刘金河,刘杰麟

摘要(Abstract):

目的:应用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR/Cas9)技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法:根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则,在BLM基因的3号外显子设计2条靶向小向导RNA(sgRNA),利用PX459V2质粒载体,构建PX459V2-sgRNA重组质粒;将建构成功的重组质粒转染至MDA-MB-231细胞中,通过嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,使用CruiserTM核酸内切酶检测打靶效率,将打靶效率较高的阳性克隆进行单克隆培养,再利用免疫印迹法检测筛选出敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株。结果:测序结果表明重组质粒构建成功,免疫印迹法显示敲除BLM基因后的MDA-MB-231细胞中BLM蛋白明显降低,与空白对照组相比,BLM-KO组BLM表达水平明显低于对照组。结论:应用CRISPR/Cas9技术成功构建了BLM基因敲除的MDA-MB-231细胞株。

关键词(KeyWords): 规律成簇间隔短回文重复序列系统;基因敲除;BLM基因;MDA-MB-231细胞;乳腺癌

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(81360349);贵州省应用基础研究计划重大专项子课题[黔科合 J重大字(2015)2003];贵州省普通高等学校创新人才团队建设项目,黔教合人才团队字[2015]

作者(Author): 黄晏军,郑艺,汤长宁,刘金河,刘杰麟

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